对更大、更复杂样品进行更快、更高效的分析的需求推动了实验室先进仪器的开发，从而催生了能够满足日益增长的生产力和准确性需求的改进型仪器。对于化合物的鉴定和定量分析，液相色谱 (LC) 与质谱 (MS) 联用技术因其卓越的分离能力和分辨能力而成为首选技术。

三重四极杆质谱仪 (LC/MS/MS)因其极低的检测限、优异的特异性和选择性，在处理高难度基质的实验室中备受青睐。这些因素对实验室运营的效率和成本效益有着积极的影响。

此外，LC/MS/MS 解决方案也得到了改进，增加了自动化程度并降低了分析工作流程的复杂性，同时增加了实验室的正常运行时间并减少了维护需求。

LC/MS/MS 工作原理

LC/MS/MS 分析工作流程始于液相色谱仪 (HPLC) 分离并浓缩样品成分，然后进入质谱仪 (MS)。在质谱仪中，四极杆通过施加振荡射频和直流电场来过滤离子，从而根据离子的质荷比 (m/z) 实现分离。在三重四极杆配置中，第一个四极杆分离分析物分子离子，第二个四极杆碎片选择分子离子，第三个四极杆选择性地分离离子碎片，以便通过检测器进行测量。

虽然LC/MS/MS系统被称为三重四极杆仪器，但从技术上讲，它是一种串联四极杆质谱分析器。第一和第三个四极杆是质谱分析器，而第二个四极杆则用作碰撞池。这种方法可以提供更丰富的结构信息、更高的选择性和灵敏度，并确保信号稳定、纯净。

对于寻找样品中特定质量的分析人员来说，单四极杆质谱仪非常实用，因为它们能够从相对干净的样品基质中选择特定质量。然而，区分相同质量的分子，或辨别复杂混合物或基质中的分析物，则需要三重四极杆仪器。

LC/MS/MS 的 5 个步骤

1.样品制备后，在液相色谱仪（HPLC）中分离、浓缩。

2.在质谱仪的离子源中，分子变成带电离子。根据质谱仪检测的样品类型，已经开发出不同的电离技术。最常见的技术包括：

• 电喷雾电离( ESI ) 使用电喷雾产生离子，即向液体施加高电压以产生气溶胶。ESI也称为“软电离”技术，产生的碎片很少。因此，采用 ESI 作为电离技术的 LC/MS/MS 系统在从大分子中产生离子时特别有用，因为它克服了这些分子在电离时碎裂的倾向。^{电喷雾电离技术最早由 Masamichi Yamashita 和 John Fenn 于 1984 年报道，他们于2002}年因开发用于分析生物大分子的电喷雾电离技术而获得诺贝尔化学奖。电喷雾的软电离特性使其非常适合定量研究。由于目标分子保持完整，因此可以选择单个离子，从而可以观察到该分析物的最大灵敏度。
• 大气压化学电离 (APCI) 源：随着分子极性的降低，电喷雾使其电离的倾向也随之降低。APCI 正是为此而开发的。液体被泵入毛细管，并在尖端雾化。电晕放电发生在毛细管尖端附近，最初使离子源中的气体和溶剂分子电离。

3.在质谱仪中，四极杆过滤器根据离子的质荷比 (m/z) 分离离子。在三重四极杆配置中，第一个四极杆分离分析物分子，第二个四极杆碎片选择分子离子，第三个四极杆选择性地分离离子，以便通过检测器进行测量。

4.离子和离子碎片到达静电检测器并产生电流，专用软件将其转换为质谱。

5.质谱绘制了样品中不同质荷比 (m/z) 与它们的丰度（特定离子的出现频率除以最丰富离子的出现频率）的关系。